尊龙凯时 提供的实验准备和操作方法将指导您如何进行人多能干细胞（hPSC）培养、传代及冻存的相关实验，确保在无菌条件下进行，以提高实验的成功率。

一、实验准备

尊龙凯时 人多能干细胞培养基的配制步骤如下：

1. 解冻hPSCMediumSupplement：将其放置在2-8℃环境下解冻，融化后上下晃动混匀，根据实际需要进行分装，立即使用或储存于-20℃至-80℃，避免反复冻融。
2. 培养基配制：按照1:50的比例将10mL的hPSCMediumSupplement加入到500mL的hPSCMediumBasalMedium中，搅拌均匀，即可得到人多能干细胞培养基（ab9403）。注意：混匀后可在2-8℃保存2-3周，超过3周的不建议使用。
3. 试剂平衡：实验前将人多能干细胞培养基放置于室温下避光平衡；PBS及消化液等需加热至37℃，切忌将培养基置于37℃水浴中加热，以免影响因子活性。

二、操作方法

以下所有步骤必须在无菌条件下进行：

细胞复苏

1. 基质胶包被：将6孔或12孔板取出，每孔加入1mL或0.5mL即用型基质胶（ab9410），轻轻摇晃使基质胶完全覆盖底部，置于37℃培养箱孵育1-2小时，实验前置于超净工作台平衡20分钟。
2. 准备培养基：加入2-3mL的干细胞培养基于15mL离心管中备用。
3. 解冻细胞：将冻存管快速浸入37℃水中摇匀，确保在1-2分钟内迅速解冻，尽量减少细胞暴露在室温的时间。
4. 离心处理：将解冻后的冻存液逐滴加入含干细胞培养基的15mL离心管中，低速离心1000rpm 3分钟。
5. 重悬细胞：离心后弃去上清液，加入1mL人多能干细胞培养基，轻柔吹打3-5次均匀混合。
6. 接种细胞：弃去已平衡的基质胶，将混合良好的细胞悬液加入包被好的6孔板中，每孔补全2mL培养体系。
7. 培养观察：在适宜条件下培养，第二天观察细胞贴壁情况，细胞团块应达到4个以上以符合标准。
8. 定期换液：自复苏起每24小时更换新鲜培养基，因培养基活性成分仅能支持一天。

细胞传代

1. 清洗细胞：吸掉原有培养基，加入1mL PBS缓冲液轻轻摇动后吸去。
2. 消化细胞：加入2mL人多能干细胞消化液（ab9409），在37℃中消化2-5分钟，根据细胞生长密度调整消化时间。
3. 吹打细胞：消化后吸掉消化液，加入2mL人多能干细胞培养基，轻柔吹打3-5次以使细胞脱落并转移至离心管中。
4. 离心处理：1000rpm离心3分钟，弃去上清。
5. 细胞接种：加入细胞悬液重新吹打均匀后，将细胞转移到培养板，每孔补全2mL的培养体系。
6. 定期换液：传代后同样每24小时更换新鲜培养基，确保细胞的活性。

细胞冻存

1. 清洗、消化及吹打步骤与细胞传代过程一致。
2. 离心后弃上清，加入2mL保护性冻存液（ab9412），轻柔混合后加入冻存管中。
3. 准确标记冻存管，记录细胞类型、时间及操作者等信息。
4. 将冻存管直立放置于-80℃冰箱过夜，然后转移至液氮中进行长期保存。

尊龙凯时为您提供的这一系列实验操作指导，能够有效提高人多能干细胞相关实验的效率和成功率，确保获得高质量的细胞样本。如果您有更多需求或疑问，随时联系我们的专业团队。